维生素C(又称抗坏血酸,VC)是植物材料中普遍存在的一类酸性、还原性物质,也是维持人类健康所必需的的维生素类物质之一。维生素C含量的多少与果蔬的品质、营养价值、抗病及抗衰老能力直接相关。所以,研究中经常需要测定维生素C的含量。

 

    维生素C可分为还原型和脱氢型两种。根据其具有还原性的性质,有多种方法可以测定维生素C含量。一般有2,6-二氯靛酚滴定法、荧光比色法和钼蓝比色法,前者用于测定还原性维生素C,后两种用于测定总维生素C含量。这里我们主要介绍钼蓝比色法。

维生素C

钼蓝比色法原理:

    钼酸铵在SO42-和PO43-存在下与维生素C反应,生成蓝色络合物(钼蓝),在760nm处有最大吸收。当维生素C浓度在2-40μg·mL-1范围内,符合朗伯-比尔定律。新鲜植物样品中的还原糖及常见的还原物质不干扰测定,而且反应迅速,专一性好。

试剂

(1).5%钼酸铵溶液:称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中,并定容至100mL。
(2).草酸-EDTA溶液:称取6.30g草酸和0.75g EDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000mL。
(3).5%(体积分数)H2SO4
(4).偏磷酸-乙酸溶液:取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48mL,溶解后加蒸馏水稀释至100mL(必要时过滤),在冰箱中可保存3d。
(5).维生素C标准溶液:精确称取分析纯维生素C 100mg,置100mL容量瓶中,加适量草酸EDTA溶液溶解后,再用该溶液定容到100mL刻度,即成1mg·mL-1之标准液,此溶液随配随用(如果维生素C纯度不够,应进行标定)。

方法步骤:

1.制作标准曲线

试剂 试管号
1 2 3 4 5 6
维生素C标准液/mL 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
草酸 EDTA/mL 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0
偏磷酸-乙酸/mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
1:19 H2SO4/mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
5%钼酸铵/mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
维生素C含量/mg 0 20 40 60 80 100

    加完试剂摇匀后,置30℃水浴中保温15min,用蒸馏水稀释到25mL刻度,将溶液混匀,用1号空白管调零,在760nm波长下比色,记录吸光度,以标准维生素C含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

2.样品的提取与测定:

    称取小麦叶片或其他植物组织2-5g(根据维生素C含量而定),加5mL草酸EDTA溶液研磨成匀浆,并仔细转入25mL容量瓶中,再用提取介质冲洗研钵及研锤2-3次,冲洗液合并于25mL容量瓶中。取一部分匀浆液经3000g离心10min后,取1mL上清液与标准管同法测定。若样品显色液中出现沉淀时,可过滤后进行比色,不影响测定结果。

维生素C测定计算公式

    式中,C:标准曲线上查得样品中维生素含量(mg);Vt:样品提取液总体积(mL);Vs:测定时用样品提取液体积(mL);FW:植物组织鲜重(g)。

附注

    温度对显色有影响,颜色强度随时间的延长而加深,因此显色温度和加入显色剂后的时间要求一致。

400-066-8286