原理

    植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛(分子式见蒽酮法)能与苯酚缩合成-一种橙红色化合物,在10- 100 mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定吸光度。苯酚法可用子甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,试剂便宜,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色可稳定160 min以上。

材料、仪器设备及试剂

⑴材料

    新鲜的植物叶片。

⑵仪器设备

     分光光度计,水浴锅,刻度试管,刻度吸管。

⑶试剂

    ①90%苯酚溶液。称取90g苯酚(AR),加蒸馏水10mL溶解,在室温下可保存数月。

    ②9%苯酚溶液。取3mL90%笨酚溶液,加蒸馏水至30mL,现配现用。

    ③浓硫酸(比重1.84)。

    ④1%蔗糖标准液。将分析纯蔗糖在80C下烘至恒重,精确称取1.000g,加少量水溶解,转人100 mL容量瓶中,加入0.5 mI,浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。

    ⑤100 ug/L蔗撕标准液。精确吸取1%蔗糖标准液1 mL加人100 ml容量瓶中,加水至刻度。

实验步骤

    (1)标准曲线

    取20mL刻度试管11支,从0~10分别编号,按表1加入溶液和水。

表1 苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量
试剂	管号
	0	1.2	3.4	5.6	7.8	9.10
100 ug•L-1蔗糖液/mL	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
水/mL	2.0	1.8	1.6	1.4	1.2	1.0
蔗糖量/ug	0	20	40	60	80	100

    然后按顺序向试管内加入1mL 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以5-20s加入5mL浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8mL,在室温下放暨30min,比色。然后以空白为参比,在485 nm波长下比色测定吸光度,以糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标推曲线方程。

    (2)可溶性糖的提取

    取新鲜植物叶片,擦净表面污物，剪碎混匀,称取0.10-0.30g,共3份(或干材料),分别放人3支刻度试管中,加入5-10 mL蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30 min(提取2次),提取液过滤入25mL容量瓶中,反复漂洗试管及残渣,定容至刻度。

    (3)测定

    吸取0.5 mL样品液于试管中(重复2次),加蒸馏水1.5 mL,步骤与制作标准曲线相同,按顺序分别加人苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定吸光度。由标准曲线查出糖的含量。

结果计算

    按下式计算测试样品的糖含量。