根不但是水分和矿质营养的吸收器官,而且还是重要的合成器官,根系吸收的无机盐,有一部分在根中即进行初级同化,转变成有机物并向地上部运输。根的吸收与同化能力越强,向地上部输送的营养物质数量越多,有机物占的比例越大。因此,测定伤流液中无机磷等营养物质的数量,可以评价根的吸收能力与合成能力。

    本文介绍了磷钼蓝比色法定量测定植物伤流液无机磷含量的原理、实验器具、实验流程以及实验注意事项。

一、原理:

     在适宜的酸性条件下,磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸铵,后者又能被还原剂(如维生素C、氯化亚锡等)还原成蓝色的磷钼蓝,其蓝色深浅与磷含量成正比。

二、仪器设备

1. 721型分光光度计:1台。
2.分析天平(感量0.1mg):1台。
3.托盘天平(感量0.1g)。
4.恒温水浴附水浴试管架:1台。
5.试管:20 mm X150 mm 7-10个。
6.量筒:100mL 1个。
7.烧杯100mL、1000mL各1只。
8.容量瓶:100mL、1000mL各1只。
9. 试剂瓶:1000 mL、100mL、60mL各1个。

三、试剂

     1. 3mol•L-1 H2SO4溶液:用量筒量取166mL密度1.84 g•mL-1的浓H2SO4,边搅拌边逐渐加人盛有500mL蒸馏水的烧杯中,待溶液冷却后,移人1000mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀即成。
     2.2.5%钼酸铵:称取化学纯的钼酸铵2.5g,先在小烧杯中加少量蒸馏水溶解,然后移入100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀即成。
     3.10%维生素C:称取维生素C1g,加人10mL蒸馏水溶解即成,该溶液须临时配制,并贮于棕色瓶中,在冰箱中可存放一个月。
     4.定磷试剂:按以下顺序及体积比例将各试剂混合即成。

蒸馏水:3 mol.L-1 H2SO4 : 2.5%钼酸铵: 10%维生素C=2: 1: 1 : 1

新配的定磷试剂为淡黄色,极不稳定,每日须新配并贮于棕色瓶中,溶液变为棕黄色即不能使用。

     5.磷标准溶液:准确称取分析纯KH2PO40. 4398g,溶于少量蒸馏水中,用10 mL容量瓶定容至刻度,摇匀,即成含P100 mg•L-1的原液。使用前用10 mL刻度吸管吸取10 mL原液,加.人100 mL容量瓶中,定容至刻度,即为含P10mg•L-1的标准液。

四、材料

所收集的植物伤流液。

五、方法步骤

    1.标准曲线的绘制:取6只试管,用玻璃铅笔编号,按下表顺序加人各种试剂。

试剂/mL 管号
1 2 3 4 5 6
含磷10mg•L-1标准液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 2.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0
定磷试剂 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
含磷量/ 0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0

加完试剂后摇匀,在45 C水浴中保温25 min,以空白作参照,在分光光度计下比色,读出吸光度(波长650 nm)。

     以含磷量/μg作横坐标,吸光度作纵坐标绘制标准曲线。

    2.样品测定:取测磷的试管,按样品号码编号,依次加入伤流液1.0mL,水2.0mL,定磷试剂3.0 mL,摇匀,在45°C水浴中保温25 min,以空白作参照在分光光度计下比色,读出吸光度,并在标准曲线_上查出无机磷含量。
    伤流液中无机磷含量一般较高,据测定,在含磷丰富的丰产田中,开花至灌浆期的玉米伤流液含无机磷约在40-100mg•L-1范围内,测定时应适当稀释伤流液使无机磷含量在4-8mg•L-1的范围内。

六、结果计算

伤流液无机磷含量

注意事项

    根据所测伤流液无机磷含量不同,必要时也要做适当的稀释。

 

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