原理

    植物器官衰老时,或在逆境条件下,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛( malondialdehyde , MDA)是其产物之一,通常利用它作为脂质过氧化指标,表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。

丙二醛测定

    MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应,形成在532nm波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物,该复合物的吸光系数为155[mmol/(L•cm)],并且在600 nm波长处有最小光吸收。可按公式

(1)

    A532-A600=155000 X C X L

    算出MDA浓度C(μmol/L),进一步算出单位重量鲜组织中MDA含量C(μmol/g)。式中A532和A600分别表示532 nm和600 nm波长处的吸光度值。L为比色杯厚度(cm)。

    需要指出的是,植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰,经试验:可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。

(2)

    C/μmol/L=6.45(A532-A600)-0.56A450

    式中A450、A532、A600分别代表450 nm、532 nm和600 nm波长下的吸光度值。用公式(2)可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度,进一步算出其在植物组织中的含量。

     紫外分光光度计,配石英比色杯,光程1cm。

材料、仪器设备及试剂

材料

    植物根或叶。

仪器设备

     研钵,试管,可调加样器,恒温水浴锅,冷冻离心机,分光光度计。

试剂

    (1)5%三氯乙酸(TCA)。

    (2)0.67%硫代巴比妥酸(TBA)。

方法步骤

     (1)取0.5g植物样品(叶、根),加5%TCA5mL,研磨后所得匀浆在3 000 r/min下离心10 min。

    (2)取上清液2 mL,加0.67%TBA 2 mL,混合后在100心水浴上煮沸30 min,冷却后再离心一次。

    (3)分别测定上清液在450nm、532nm和600nm处的吸光度值,并按公式(2)算出MDA浓度,再算出单位鲜量组织中的MDA含量(μmol/g)。

 

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