苯丙氨酸解氨酶（phenylalaninammo－nialyase ，PAL）是植物体内苯丙烷代谢途径的关键酶，其活性高低控制着植物体内多种次生酚类化合物、类黄酮植保素、木质素等抗菌物质的合成，因此PAL在植物的次生代谢和抗病代谢中具有重要作用。本文将会介绍紫外分光光度法测定PAL活性的原理和方法。

1.原理

    PAL催化L-苯丙氨酸脱氨生成反式肉桂酸，反式肉桂酸在290nm处有强吸收峰，因此可通过测定反应液A290值的变化计算PAL活性。

    苯丙氨酸解氨酶催化苯丙氨酸的脱氨反应，生成反式肉桂酸。根据反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。

2.仪器设备

（1）紫外分光光度计 （2）高速冷冻离心机
（3）研钵 （4）移液管：0.5mL 1支，1 mL 3支，2 mL 1支，5 mL 1支
（5）试管:10 mL 5支 （6）恒温水浴

3.试剂

（1）0.1 mol·L^-1 硼酸缓冲液，pH8.8。
（2）0.02 mol·L^-1 L-苯丙氨酸（用pH8.8硼酸缓冲液配制）。
（3）提取介质：内含0.05mol·L^-1 硼酸缓冲液、5.0 mmol·L^-1巯基乙醇、1.0 mmol·L^-1 EDTA-Na₂、5%甘油pH8.3；5%PVP（聚乙烯吡咯烷酮）。
（4）6 mol·L^-1 HCl。

4.材料

    正常生长或经诱导处理的水稻、小麦叶片（或黄化幼苗）、马铃薯块茎等植物新鲜组织。

5.方法步骤

（1）PAL的提取：取待测植物样品1-2g，-15℃冷冻固定后于研钵中加少量的提取介质、少量石英砂，冰浴研磨匀浆，最后用提取介质定容到10 mL，搅拌均匀，4层纱布过滤，滤液在4℃下 10000 r/min 离心15min，上清液即为待测酶液，4℃保存备用。
（2）PAL酶活性测定：取4支10mL试管（3支测定管，1支对照管），分别加入0.02 mol·L^-1 L-苯丙氨酸1.0 mL（对照管不加，代之为蒸馏水），硼酸缓冲液(pH8.8)2.0mL,酶液1.0mL（根据酶活性适当稀释或增加体积），总体积4.0mL。摇匀后置30℃恒温水浴保温60min，加0.2mL 6 mol·L^-1 HCl终止反应，若有沉淀需过滤或离心。用对照管调零，在290 nm处检测测定管反应液的吸光度A₂₉₀.
（3）以测定管反应液每小时A₂₉₀增加0.01为一个酶活性单位（U）：

    式中，V_t：酶液总体积（mL）；FW：样品鲜重（g）；V_s：测定时取酶液的量（mL）;v：反应液总体积（mL）；t：反应时间（h）

6.注意事项

（1）PAL属于诱导酶，受光（如红光）、受伤、病害感染等诱导活性增高
（2）除直接用新鲜材料提取的酶液测定外，也可将酶液用冷丙酮制成丙酮粉（可较长时间保存），然后用缓冲液溶解测定。