本文介绍了籽粒中粗蛋白质的测定方法、测定的实验步骤及其注意事项。

方法原理

氮是蛋白质中的主要成分，同类植物籽粒中蛋白质的含氮量基本上是固定不变的。因此，可用开氏法消煮定氮，再将测得的含氮值乘以蛋白质换算系数，即得粗蛋白质含量。氮含量换算成蛋白质的系数，一般采用6.25,这是由蛋白质平均含氮16%为根据导出的值,但不同植物籽粒中蛋白质的含氮量有差异，故由氮换算为蛋白质的因数也稍有不同。详见表1。以定量蛋白质为目的的总氮量测定中,开氏法分解时，硝态氮的部分氨化是不可避免的，因此蔬菜类特别是可能含有硝态氮的化合物的样品,须要用水杨酸固定硝态氮化合物,用开氏法测定总氮量,同时用离子电极法测定硝态氮的含量,再从总氮量减去硝态氮量后乘以蛋白质换算系数即得蛋白质含量。

仪器及设备

消煮炉或电炉，消煮管100 mL或50 mL,半微量定氮装置,半微量滴定管。

试剂

试剂均同土壤全氮的测定。

操作步骤

1.样品的消煮(注1)

称取烘干样品(过o.25mm筛子)0.3XXXg~0.5XXXg(注2))置于50ml或100 ml开氏瓶或消煮管中，加人混合催化剂18g,加几滴水湿润后，加5mL浓H₂SO₄,小心轻摇后(最好加塞放置过夜)，盖上小漏斗，将消煮管放置在消煮炉或电炉上，开始时用小火加热(注3)，当消煮液呈棕色时，提高温度,消煮至溶液呈清亮带浅蓝色时,再加热约10min,取下,冷却至温热时,将消煮液无损地转人100mL容量瓶中,冷却至室温后,定容并放置澄清。

2.氮的测定用

移液管吸取澄清待测液5.00mL或10.00mL放人半微量定氮仪中进行定氮(以下操作同土壤全氮的测定)。同时作空白试验，校正试剂和滴定误差,并做核对试验(注4)。

结果计算

粗蛋白质%(干基)=(V-V。) X c X 14 X 10^-3 X 分取倍数 X k X 100 ÷ m

式中:V——样品测定所消耗盐酸标准溶液的体积,mL;
V₀——空白试验所有耗去盐酸标准溶液的体积,mL;
10^-3——将 mL换算成L的系数;
c——盐酸标准溶液的浓度,mol • L
14——氮的摩尔质量,g • mol^-1;
10^-3——针 mL换算成L的系数;
分取倍数——本操作步骤中100/5或100/10;
m——样品质量,g，干基;
k——氮换算成蛋白质的系数(详见表1)。

注意事项

1.本法测定的结果为粗蛋白质的含量。如要测定纯蛋白质的含量,则样品应先用蛋白质沉淀剂如碱性硫酸铜、碱性乙酸铅、单宁酸溶液[ρ(C₇₆H₅₂O₄₆)=200g • L^-1]、三氯乙酸溶液[ρ(C₂HCl₃O₂)=100g • L^-1]等处理,将蛋白质从水溶液中沉淀出来，再测定此沉淀的全氮量,乘以蛋白质的换算系数即可得“纯蛋白质”量。其具体步骤是:称取风干磨细样品0.5XXXg~2.2XXXg,放于150 mL烧杯中,加50 mL沸水,加热至沸,5 min后取下,放置30 min(如含淀粉多的样品，则勿加热至沸，而是加人50 mL沸水，再放人40°C~ 50°C水浴中保温10 min即可，然后趁热加人CuSO₄及NaOH溶液)。然后缓缓注人硫酸铜溶液[ρ(CuSO₄)= 60g • L^-1]25 mL,用玻棒搅拌，同时加入氢氧化钠溶液[ρ(NaOH)=12.5g • L^-1]25 mL,放置0.5h~1h使沉淀完全(也可放置过夜)，用倾泻法过滤，然后用沸水洗沉淀，至滤液遇BaCl₂溶液不产生白色BaSO₄沉淀为止,间接指示非蛋白质含氮物已经洗净。将已洗净的沉淀及滤器-起放入60℃烘箱中烘至稍干即可。将已烘干的沉淀连带滤纸,无损地转人开氏瓶中，操作步骤同上操作步骤。

2.称样量的大小取决于样品的含氮量。若含氮为1%~5% ,称样量为0.30g,可根据含氮量的水平适当增减称样量。

3.在消煮过程中须经常转动开氏瓶，使喷浅在瓶壁上的样品及早回流至硫酸溶液中，特别是开始消煮后不久，会有大量气泡上逸,升温不宜过快，以防溢出。

4.核对试验是将已知量的NHt-N标准溶液[如ρ(N)=100mg • L^-1NH_4⁺-N标准溶液10mL,其中含N1mg]放入半微量定氨蒸馏装置中，按测定样品同样操作步骤进行蒸馏、滴定，用以检验蒸馏过程中的误差大小。