液质联用,即液相色谱-质谱联用技术,是目前领先的检测技术,以其高效快速的分离能力、超高的灵敏度著称.本文将介绍液质联用法的原理,优点,分离方法以及应用,对于想要发高分文章,希望自己的数据被认可的客户,可以了解一下。

液质联用优点

液质联用的原理:

    液质联用是以液相色谱为分离系统,质谱为检测系统。样品经过液相色谱分离后,流动相分流进入质谱仪,在离子源被电离,产生带有一定电荷、质量数不同的离子。质谱仪依据不同离子在电磁场中的运动行为不同来检测各个离子,根据每一个离子的质荷比(质量与电荷数比值)不同,显示在色谱图上,最后通过对色谱图的分析,得到样品的检测数据。

液质联用法对于样品的要求:

    同任何其他分析方法一样,样品前处理在LC-MS分析中是重中之重的。对所用样品,无论是什么类别,都有如下要求:
① 样品清洁,尽量不含杂质,由于蛋白质和肽类在ESI上有很强的响应,这两样化合物尤其要注意;
② 样品不宜含有高浓度的难挥发酸(磷酸,硫酸等)及其盐,这些会引起液质联用仪很强的噪声;
③ 为了防止堵塞柱子、喷口及毛细管入口,样品的粘度不要太大。

液质联用法用于样品分离的常用方法:

1.固相萃取(SPE)

    这是应用最广泛的处理样品的方法,固定相是吸附剂,流动相是萃取过程中的水样。当固定相与流动相接触时,其中的某些痕量物质就保留在固定相中。这时用少量的选择性溶剂洗脱,即可达到富集和纯化目标物的目的。

分离方法的比较
方法 优点 缺点
液液萃取法 仪器设备简单,应用广泛 工作量大,溶剂消耗大,污染环境
蛋白沉淀 操作简单,仪器设备简单 检测灵敏度低,非特异性沉淀
固相萃取 回收率高,重现性好。 需要建立方法,成本较高

2.阻定性进入介质:

    阻定性进入介质(restricted access media,RAM)有两层不同的表面,即外层表面与内层表面,外层表面通过体积排除作用仅允许小分子进入内层表面。内层表面通过传统的分配作用“捕获”被分析物。RAM介质常用于在大分子共存时小分子样品的分离和富集.可有效地除去血液和尿液中的基质。

3.灌注固相萃取:

    灌注填料是近些年才出现的一种填料,颗粒上同时有贯通型的孔以及扩散型的穴。这种填料制成的固相萃取用品或液相柱,可以以每min几十ml的速度上样,用于诸如培养基中蛋白质和肽类的分离、富集和脱盐,具有不可比拟的优势。

4.超滤:

    超滤(ultrafiltration)是一种加压膜分离技术,小分子溶质和溶剂在一定压力下,穿过一定孔径的特制的薄膜,过滤了大分子物质,从而达到纯化大分子物质的目的。具有操作简便,成本低廉,条件温和等众多优势,但不能用于蛋白溶液。

5.免疫亲和萃取:

    免疫亲和萃取是基于固相化的配基(抗体)和样品之间的相互作用的样品前处理方法,具有分离效率高、专属性高等优点。其原理是分析物(抗原)结合特异性抗体,可以通过不同于样品溶液PH或离子强度的缓冲液洗脱而达到分离和纯化的目的

液质联用的应用:

(1)植物激素的测定
(2)药物及其代谢物的分析
(3)利用多重电荷离子测定肽类,蛋白质大分子的分子量
(4)多电荷离子用于蛋白质酸诱导构象变化的观察
(5)蛋白质的一级结构测定
(6)分子生物学

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