1.原理

    在适宜的酸性条件下,磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸铵,后者又能被还原剂(如维生素C、氯化亚锡等)还原成蓝色的磷钥蓝,其蓝色深浅与磷含量成正比。

2.仪器设备

1.721型分光光度计:1台。	2.分析天平(感量0.1mg):1台。
3.托盘天平(感量0.1g)。	4.恒温水浴附水浴试管架:1台。
5.试管:20mmX150mm7-10个。	6.量筒:100mL1个。
7.烧杯100mL、1000mL各1只。	8.容量瓶:100 mL、1000 mL各1只。
9.刻度吸管:10mL1支、5mL2支、1mL1支。	10.试剂瓶:1 000 mL、100 mL、60 mL各1个。

3.试剂

1. 3mol•L^-1H₂SO₄溶液:用量筒量取166mL密度1.84g•mL^-1的浓H₂SO₄,边搅拌边逐渐加人盛有500 mL蒸馏水的烧杯中,待溶液冷却后,移人1 000 mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀即成。
2. 2.5%钼酸铵:称取化学纯的钼酸铵2.5 g,先在小烧杯中加少量蒸馏水溶解,然后移入100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀即成。
3.10%维生素C:称取维生素C1g,加人10mL蒸馏水溶解即成,该溶液须临时配制,并贮于棕色瓶中,在冰箱中可存放一个月。
4.定磷试剂:按以下顺序及体积比例将各试剂混合即成。

蒸馏水:3 mol•L^-1 H₂SO₄:2.5%铝酸铵:10%维生素C=2:1:1:1

新配的定磷试剂为淡黄色，极不稳定,每日须新配并贮于棕色瓶中,溶液变为棕黄色即不能;使用。
5.磷标准溶液:准确称取分析纯KH₂PO₄0.4398g,溶于少量蒸馏水中,用100mL容量瓶定容至刻度,摇匀,即成含P100 mg•L^-1的原液。使用前用10 mL刻度吸管吸取10 mL原液,加人100 mL容量瓶中,定容至刻度,即为含P10 mg•L^-1的标准液。

4.材料

    所收集的植物伤流液。

5.方法步骤

    1.标准曲线的绘制:取6只试管,用玻璃铅笔编号,按下表顺序加人各种试剂。

试剂/mL	管号
	1	2	3	4	5	6
含磷10mg•L-1标准液	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
蒸馏水	3.0	2.8	2.6	2.4	2.2	2.0
定磷试剂	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
含磷量/μg	0	2.0	4.0	6.0	8.0	10.0

    加完试剂后摇匀,在45℃水浴中保温25 min,以空白作参照,在分光光度计下比色,读出吸:光度(波长650 nm)。

    以含磷量/μg作横坐标,吸光度作纵坐标绘制标准曲线。

    2.样品测定:取测磷的试管,按样品号码编号,依次加入伤流液1.0 mL,水2.0 mL,定磷试剂3.0mL,摇匀,在45℃水浴中保温25min,以空白作参照在分光光度计下比色,读出吸光度，并在标准曲线上查出无机磷含量。

    伤流液中无机磷含量一般较高,据测定,在含磷丰富的丰产田中,开花至灌浆期的玉米伤流液含无机磷约在40-100 mgL^-1范围内,测定时应适当稀释伤流液使无机磷含量在4-8mg•L^-1的范围内。

    3.计算结果

注意事项

    根据所测伤流液无机磷含量的不同，必要时也要做适当的稀释。

 

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