1.原理

    吲哚乙酸（IAA）在IAA氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内IAA氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，从而影响植物的生长。酶活力的大小可以破坏吲哚乙酸的速率表示之。吲哚乙酸的含量可以用比色法测定。

2.试剂

(1).20 mmol·L^-1磷酸缓冲液，pH6.0
(2).1 mmol·L^-1 2，4-二氯酚：称取二氯酚16.3mg，定容至100mL蒸馏水中。
(3).1 mmol·L^-1 MnCl₂：精确称取MnCl₂·4H₂O 19.8mg，定容至100mL蒸馏水中。
(4).1 mmol·L^-1吲哚乙酸：称取IAA17.5mg 用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90mL蒸馏水的容量瓶中（100mL）稀释至刻度。
(5).吲哚乙酸试剂A（A或B任备其中之一，试剂B较试剂A灵敏）：15mL 0.5mol·L^-1 FeCl₃，300mL浓H₂SO₄，500mL蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。用时1mL样品中加入试剂4mL。
(6).吲哚乙酸试剂B：10mL 0.5mol·L^-1 FeCl₃、500mL 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。用时1mL样品中加入试剂2mL。

3.方法步骤

(1).将大豆或绿豆种子于30℃温箱中萌发3〜4 d，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。
(2).取20株胚轴，称得重量，置研钵中，加入预冷的适量磷酸缓冲液，石英砂少许，置冰浴中研磨成匀浆。再按100 mg鲜重材料加1 mL提取液的比例，用磷酸缓冲液定容到10 mL 离心 (4000 r/min)20 min,所得上清液即为粗酶液.
(3).取试管4支，编号，在1〜3号试管中各加入MnCl₂ 1 mL，2，4-二氯酚1 mL,IAA 2mL，酶液1mL,磷酸缓冲液5 mL,混合均匀.在4号试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于30℃恒温水浴中，保温30min.
(4).从每个试管中吸取反应混合液2 mL,加入吲哚乙酸试剂B 4mL,摇匀，置于30℃黑暗处保温30 min,使显色。
(5).将显色后呈红色的反应液于分光光度计中测定吸光度，测定使用波长530 nm。
(6).标准曲线的制作
①配制吲哚乙酸溶液，浓度分别为0、0.5、1.0、2.5、5.0、15、20、25、35μg·mL^-1
②取干净的大试管9支，每支加入吲哚乙酸试剂B 4mL，再分别加入不同浓度的吲哚乙酸溶液2mL,摇匀，并于40℃的黑暗处保温30min。
③测定反应液在530nm处的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线或进行回归，求得标准曲线的回归方程。
(7).根据读数从标准曲线上查出相应的吲哚乙酸残留量（或从回归方程计算反应液中IAA的残留量）。
(8).从开始时加入的吲哚乙酸量减去酶作用后残留的吲哚乙酸量，即得被酶所分解破坏的吲哚乙酸量。以每毫升酶液在1h内分解破坏吲哚乙酸量（μg）表示酶活力的大小。按下式计算样品中酶的活力，单位为μg IAA·g^-1FW·h^-1

式中，U：样品中酶活力（μg IAA·g^-1FW·h^-1）；
c₁：反应液中残留的IAA含量（μg·mL^-1）；
V_s：反应液中酶液的体积（mL）;
V_T：样品制得的酶液总体积（mL）;
t:反应时间（min）；
FW：样品鲜重（g）。

4.注意事项

反应液中IAA的起始浓度为35μg/mL，A₅₃₀已接近1，会带来较大的测量误差（吸光度值在0.2-0.6左右时测量的误差最小），因而可将反应液稀释后进行测定。