生物材料中脂肪含量及组分分析在鉴别品质优劣、选种和种质资源调查等研究和食品营养评价中都具有重要意义。本实验介绍脂质的索氏抽提方法,熟悉植物粗脂肪的经典测定方法。

原理:

      植物细胞内脂肪以油滴状态存在,易溶于有机溶剂中,而蛋白质、糖类和无机盐则不溶于其中。因此植物组织中脂肪的含量可用乙醚或石油醚来提取。但抽提的物质中,除脂肪外还有其他能溶于有机溶剂的物质,如游离脂肪酸、磷脂、植物固醇、石蜡、芳香油、色素、有机酸、挥发油等。通常将这样的提取物成为粗脂肪。在油质种子及胚中,油脂占提取物的主要部分;在根、茎、叶等器官中,油脂仅占一小部分,此外采用沸点低于60℃的有机溶剂抽提时,样品中结合状态的脂质(主要是脂蛋白)不能被直接提取出来,所以该法仅适用于游离脂质的定量测定。

      粗脂肪含量的测定一般采用索氏脂肪提取器,下图是全自动脂肪测定仪,可以迅速准确地测定脂肪含量。

粗脂肪测定仪

试剂

石油醚(沸程30-60℃)或乙醚

方法步骤:

1.样品的准备

      称取样品的量根据材料中脂肪含量多少而定。通常脂肪含量在50%以上的,准确称取2-4g;脂肪含量少于10%的,则称取10-12g。

      将样品在80-100℃烘箱中烘去水分,一般烘4h。若未烘干,则须测定样品的含水量。将烘干的样品研碎,含油多而且容易流失的(如蓖麻、芝麻种子等),研碎后要用脱脂棉将研钵擦净,一起放入烘干并称过重的样品袋内抽提。用少量石油醚冲洗研钵,也倒入索式提取器的提取管中。

2.索式提取器的安装

      索式提取器共分三部分,底部为一烧瓶,中间是带有虹吸管与连接管的提取管,上面是一个回流冷凝器。仪器各部分均由磨口相连,操作时要小心,以免将仪器损坏。

      实验前应将仪器洗净,烘干。实验时按图将仪器安装固定好,接通冷却水管,将烧瓶浸入水浴锅 中(约占其体积1/3),注意在磨口连接部分不能涂抹凡士林,但不能漏气。

3.抽提

      将称好的样品(连同擦拭研钵的脱脂棉)放入称至恒重的纸袋(或纸包)中,再把纸袋放进提取管中(注意勿使样品袋高于虹吸管)。向提取管加入石油醚以浸润样品(切勿超过虹吸管),同时向下部烧瓶内加入约占其体积1/3的石油醚。然后将仪器重新安装好,拧开冷却水龙头,同时按通电热水浴锅电源,使烧瓶内之石油醚沸腾(夏天使水温保持在50〜60℃冬天使水温保持在60〜70℃)。

      在加热时石油醚蒸发,石油醚蒸气经侧面的连接管上升至冷凝器,凝结成液体,滴入抽提管中,此时样品内的脂肪为石油醚所提取。

      待石油醚液面超过虹吸管高度后,溶有脂肪的石油醚经虹吸管流入烧瓶。如此循环抽提,一般经14〜24h后,样品中的脂肪即可全部被抽提至石油醚中。如需检査脂肪是否提取完全.可从提取管内吸取几滴石油醚滴在干净的滤纸上。待石油醚挥发后,滤纸上不留油脂斑痕即表示已经提取完全。

4.称重

      提取完毕后,先关上水浴锅电源,取出烧瓶。待冷却后拆开索氏提取器,取出滤纸袋,放在表面皿上,盖上干净的纱布,置室外让残余的石油醚挥发。然后放在100〜105 ℃烘箱中 8 h,取出后放在干燥器中冷却,称重。

结果计算:

按下式计算样品中粗脂肪含量:

粗脂肪计算公式

式中,W:称取样品时的烘干重;W1:提取后残留样品的烘干重。

各种植物种子粗脂肪含量
植物名称 部位 粗脂肪含量/% 植物名称 部位 粗脂肪含量/%
向日葵 种子 23.5-45.0 大豆 种子 10.0-25.0
种仁 40.0-67.8 豌豆 种子 0.7-1.9
棉花 种子 17.2-28.0 菜豆 种子 0.7-3.7
种仁 31.5-44.5 油菜 种子 38.0-49.5
蓖麻 种子 41.5-58.5 芥菜 种子 35.0-46.0
芝麻 种子 46.1-61.0 大麦 种子 1.7-4.6
花生 种仁 40.2-60.7 小麦 种子 1.6-2.6
玉米 种子 3.9-9.0 水稻 种子 1.3-2.4

注意事项:

1.样品袋必须严密,以防止样品漏出。

2.索式提取器各接口处必须十分严密,避免漏气,以防止有机溶剂逸出。

3.含油量高的样品,抽提脂肪之前最好能用石油醚浸泡样品过夜。

4.提取是否完全可将冷凝器中流出的提取液滴于滤纸上,待溶剂挥发完后,滤纸上无透明油斑,提取即告完成。

400-066-8286