本文介绍了DNA的琼脂糖凝胶电泳的实验方法,包括DNA的琼脂糖凝胶电泳实验的原理,实验所需试剂,实验步骤以及实验注意事项。

维生素E

原理:

      DNA在碱性的溶液中带有负电荷,因此,在电场作用下朝正极移动。在琼脂糖凝胶中电泳时,由于琼脂糖凝胶具有一定孔径,长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一,迁移的速度不同,从而可以按照相对分子质量大小得到有效分离。溴化乙锭可插人到DNA分子的双链中。在紫外光的照射下,插人溴化乙锭的DNA呈橙红色荧光,所以溴化乙锭可以作荧光指示剂指示DNA含量和位置。

材料、仪器设备及试剂

(一)材料

      相对分子质量不同的DNA片段。

(二)仪器设备

      电泳仪,紫外检测仪,水平电泳槽,移液器,一次性手套。

(三)试剂

      (1)pH 8.3 Tris一硼酸- EDTA缓冲液:称取10.78g This 、5.500g硼酸0.930gEDTA- Na2溶于无离子水,定容到100 mL,用时稀释10倍。

      (2)EB溶液:溴化乙锭(10 mg/mL)(用时稀释10倍),

      (3)加样缓冲液:50%甘油+0.25%溴酚蓝。

      (4)琼脂糖。

      电泳仪,紫外检测仪,水平电泳槽,移液器,一次性手套。

DNA的琼脂糖凝胶电泳实验步骤

(一)琼脂糖凝胶的制备

      (1)称取琼脂糖1g,加人10倍电泳缓冲液10mL,再加入蒸馏水90mL,在电炉上加热溶解,配制成1%琼脂糖凝胶,稍凉后加入配好的EB溶液数滴。

      (2)将电泳模板两端密封,倒人琼脂糖凝胶溶液,捕人梳子。

      (3)冷凝后将梳子拔出,电泳胶放人电泳槽中。

(二)加样

      取样品溶液20ul,加人1/5体积加样缓冲液,混匀后,将溶液加到样品孔中,同时在另一样品孔中加入标准相对分子质量DNA。一般DNA样品最奸控制.在0.5~ 1.0ug之间。

(三)电泳

      加人pH8.3 Tris-硼酸-EDTA缓冲液,通电维持2~4 V/cm,电泳至溴酚蓝走到胶底部边缘时停止电泳。

(四)染色及观察

      电泳完毕,取出凝胶模具,将其推到一块干净的玻璃板上,于254 nm或300nm波长紫外灯下观察,DNA存在的位置呈现橙黄色荧光,放置时间超过4~6h后荧光减弱,因此应立即用园产全色胶卷拍照,并应加上红色滤色镜。

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