原理：

      考马斯亮蓝G - 250( Coomassie briliant blue G - 250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465 nm.后者在595 nm。在一定蛋白质浓度范围内(1-1000ug),蛋白质与色素结合物在595 nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。

      考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合反应十分迅速,2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1 h内保持稳定。此法灵敏度高(比斐林一酚法还高4倍),易于操作,干扰物质少,是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低,且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。

材料、仪器设备及试剂

(一)材料

      小麦叶片及其他植物材料。

(二)仪器设备

      722分光光度计,研钵,烧杯，量瓶，移液管,具塞刻度试管等。

(三)试剂

      (1)标准蛋白质溶液:100 ug/mL. 牛血清白蛋白:称取牛血清蛋白25 mg,加水溶解并定容至100mL,吸取上述溶液40mL,用蒸馏水稀释至100mL即可。

      (2)考马斯亮蓝G-250溶液:称取100 mg考马斯亮蓝G-250,溶于50 mL90%乙醇中,加人100 mL 85% (W/V)的磷酸,再用蒸馏水定容到1L,贮于棕色瓶中。常温下可保存一个月。

考马斯亮蓝G-250染色法实验步骤：

(一)标准曲线的绘制

      取6支具塞试管,按表1加人试剂(0-100 ug/mL的标准蛋白)。混合均创后,向各管中加人5 ml考马斯亮蓝G-250溶液,摇匀,并放置5min左右,用1cm光径比色皿在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标推曲线。

表1  绘制标准曲绒的各试剂加入量
管号	1	2	3	4	5	6
标准蛋白质/mL	0	0.20	0.40	0.60	0.80	1.00
蒸馏水量/mL	1.00	0.80	0.60	0.40	0.20	0
蛋白质含量/ug	0	20	40	60	80	100

(二)样品测定

      (1)样品提取。方法与斐林-酚试剂法相同。

      (2)吸取样品提取液1.0 mL,放人具寨试管中(每个样品重复2次),加人5 mL考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合,啟置2 min后在595 nm下比色,测定吸光度,并通过标准曲线查得蛋白质含量。

结果计算

      式中:C、V_T、W_F、V_S的表示意义与斐林-酚试剂法相同。