样品中待测组分

      样品中待测组分的测定可采用化学分析、物理分析等方法,而现代的植物生理生化实验则越来越多地依赖于仪器分析方法。但待测样品在上机之前,则要经过一些特异处理,提供特异的信号,才能使仪器作出反应。如比色技术、色谱技术等,多以化学变化过程中待测组分与试剂反应发生颜色的消长,通过仪器检测即可得知某组分的含量。其中像茚三酮比色法测定氨基酸含量,就是利用氨基酸在酸性条件下与水合茚二酮作用后能产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物,在一定范围内,其颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。又如核磁共振技术、火焰分光光度技术、荧光光谱技术、紫外光光谱技术、红外光光谱技术和旋光分析技术等,则是基于待测组分在特定的物埋状态下具有相应的物理特性而进行测试的。其中如荧光分析蛋白质N-末端氨基酸组成的DNS法,就是利用荧光试剂DNS-CI与氨基酸在pH 10左右的碱性条件下作用形成一类称为 DNS-氨基酸的衍生物。这类衡生物在254nm或365nm的紫外光下可发出强烈的黃色荧光,根据其荧光的强弱即可在紫外分析仪上检测N-末端氨基酸的种类。核酸及其衍生物、核苷酸、核苷、嘧啶和嘌呤均有紫外光吸收的性质,因此,都可以用紫外分光光度计进行定量测定。

       在植物生理生化实验技术中,对同一待测组分含量可以采用不同的测定方法。植物组织水势的测定方法有:小液流法、折光仪法、压力室法;植物体内硝酸还原酶活力测定的方法有活体法、离体法;植物呼吸速率的测定方法有红外线CO2气体分析仪法、微量呼吸检压计(瓦氏呼吸计)法.氧电极法、小篮子法(广口瓶法)、气流法等;植物组织中可溶性蛋白质含量测定方法有双缩脲法.斐林-酚试剂法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝G-250染色法、紫外吸收法等;植物组织中核酸含量测定的方法有定磷法、戊糖比色法(苔黑酚法)、二苯胺试剂法、紫外光吸收法等。在实际工作中应当根据测试的目的、要求、样品的特点以及实验设备条件,选择合适的方法,制定合理的检测实施方案。

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