比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。以生成有色化合物的显色反应为基础,比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。

    应用:食品中蛋白质含量、植物有机物代谢组分

一、操作步骤

1. 用相同型号的比色管。
2. 配制等体积的系列标准样品。
3. 配制待测样品(与标准样品等体积)。
4. 对比,找出相同的浓度。

    特点:(1)简单、成本低、分析速度快。
        (2)干扰严重,被测组分需要纯度较高,灵敏度低。

比色法测定
二、常用方法

    常用的比色法有两种:目视比色法和光电比色法,两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。

    1、目视比色法

    常用的目视比色法是标准系列法,该法采用一组由质料完全相同的玻璃制成的直径相等、体积相同的比色管,按顺序加入不同量的待测组分标准溶液,再分别加入等量的显色剂及其他辅助试剂,然后稀释至一定体积,使之成为颜色逐渐递变的标准色阶。再取一定量的待测组分溶液于一支比色管中,用同样方法显色,再稀释至相同体积。将此样品显色溶液与标准色阶的各比色管进行比较,找出颜色深度最接近于样品显色溶液的那支标准比色管,如果样品溶液的颜色介于两支相邻标准比色管颜色之间,则样品溶液浓度应为两标准比色管溶液浓度的平均值。
  标准系列法的主要优点是设备简单和操作简便,但眼睛观察存在主观误差,准确度较低。

    2、光电比色法

    光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度,将吸光度对浓度作图,绘制工作曲线,然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲线上查得其浓度或含量。与目视比色法相比,光电比色法消除了主观误差,提高了测量准确度,而且可以通过选择滤光片和参比溶液来消除干扰,从而提高了选择性。

三、注意事项

1、选择合适的熔样方法,制备合适的试样溶液。
(1)氢氧化钠为熔剂,盐酸分解;
(2)碳酸钠烧结,盐酸分解或碳酸钠烧结,氯化铵重量法测定纯SiO。时的滤液,以及纯SiO。残渣经焦硫酸
钾熔融后分解溶液,二者合并;
(3)碳酸钠一硼砂为混合熔剂,稀硝酸和稀硫酸溶解后之滤液,或者稀硝酸溶解液,或浓盐酸分解。

2、显色反应
(1)掩蔽剂与显色剂应有正确的配制和保存方法,否则影响吸光度。
(2)显色温度与时间。显色反应有一定的温度和时间要求,如高碘酸钾氧化比色法分析MnO,应微沸10~15min使显色完全,并冷却至室温下比色。二安替比林甲烷比色法分析TiO。,由于显色反应较慢,显色时间则需较长时间(40min以上)。

3、比色
    比色仪器分光光度计应定期检定,应选择正确的波长,合适光程的比色皿。色皿应保持干净,受污染的比色皿可用稀硝酸浸洗,用镜头纸擦拭表面,比色皿内液体不能有气泡或悬浮物。通常情况下,比色测定在室温进行。

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