色谱分析技术以其分离速度快、分离效率高、灵敏度高等众多优点，被广泛应用于植物/水质/土壤检测等领域。不管是色谱柱的使用还是检测数据的色谱分析都会遇到很多问题，本文将会整理这方面的问题并加以分析解决。
1.刚买来的色谱柱需要注意什么？
新买的色谱柱需要进行活化，新的色谱柱在使用之前，必须用100%甲醇 30-40 倍柱体积进行冲洗活化。
2.如何过渡到流动相？
先用流动相使用的有机溶剂冲洗 20-30 倍柱体积，将流动相中的缓冲盐换成水，冲洗 20-30 倍柱体积，继续用流动相冲洗 30-40倍柱体积。
3.色谱柱使用后怎么进行冲洗保存？
使用完色谱柱，先用乙腈：水=10:90 冲洗 60 倍柱体积，再用100%乙腈冲洗 40 倍柱体积，保存于乙腈中，最后注意拧紧色谱柱两头的堵头，放置好。如果长时间不用色谱柱，要定期用乙腈冲洗色谱柱，保证色谱柱中的保存液不干涸。
4.基线不平？
（1）可能是平衡时间过短：延长平衡时间。
（2）色谱柱被污染了：冲洗色谱柱。
（3）色谱柱没有连接好，有漏液现象：检查连接情况。
（4）液相仪器检测器污染：进行仪器维护。
（5）液相仪器检测器氘灯能量过低：更换检测器氘灯。
5.遇到鬼峰怎么办？
（1）进样阀残余峰：用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗。
（2）样品中未知物：处理样品。
（3）柱未平衡：重新平衡柱，用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）。
（4）三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）：每天新配，用抗氧化剂。
（5）水污染（反相）：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水。
6.主峰与杂质峰分不开？
（1）调整流动相比例，加大缓冲液的比例。C18 柱调整流动相至离子对试剂：乙腈=92：8，C8 柱调整流动相至离子对试剂：乙腈=90：10（液相方法）。
（2）将柱温设置于 40℃以上。
7.色谱柱蛋白污染，如何再生？
冲洗色谱柱的步骤如下：（前步无法将色谱柱再生，进行下一步）1%乙酸水溶液 →1%三氟乙酸水溶液 → 0.1%三氟乙酸：异丙醇=40:60 → NaCl，Na3PO4，Na2SO4 水溶液 0.5-1.0M (Na3PO4 pH7.0) →DMSO：水=50:50/DMF：水=50:50。
8.主峰出现裂分，峰型较宽怎么办？
（1）样品体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%。
（2）色谱柱污染：冲洗色谱柱，若严重污染，更换色谱柱。
（3）色谱柱填料塌陷：维修或更换色谱柱。
（4）液相仪器柱外效应过大：更换管路，减小柱外效应。
（5）溶剂效应：用国标方法溶解，降低溶解溶剂强度。
（6）将色谱柱柱温过低：提高柱温。
9.压力不稳是什么原因，如何解决？
（1）泵内有空气：清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。
（2）泵密封垫损坏：更换密封垫。
（3）比例阀失效：更换比例阀。
（4）溶剂中有气泡：对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。
（5）系统漏液：找出漏点，密封。
（6）梯度洗脱：压力波动是正常的。
（7）单向阀堵塞：超声波清洗单向组件。
（8）单向阀泄露：更换密封装置。
10.保留时间延长？
（1）流速下降：管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡。
（2）硅胶柱活性变化：可以用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用其它碱钝化色谱柱柱。
（3）键合相流失：流动相 pH 值超出适用范围，色谱柱连接方向错误。
（4）流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀。
（5）温度降低。
11.保留时间缩短？
（1）流速增加：检查泵，重新设定流速。
（2）样品超载：降低样品进样量。
（3）键合相流失，流动相 pH 值超出适用范围，色谱柱连接方向错误。
（4）流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀。
（5）温度增加。
12.峰拖尾怎么处理？
（1）柱超载：降低样品量，增加柱直径或采用较高容量的固定相。
（2）峰干扰：清洁样品，调整流动相。
（3）硅羟基作用：加三乙胺，用碱屏蔽硅羟基活性，增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值，钝化样品。
（4）筛板堵塞：超声清洗或更换筛板，加在线过滤器过滤样品。
（5）柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件。
（6）死体积或柱外体积过大：尽可能采用细内径的连接管。
（7）柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱或采用保护柱。
13.峰展宽怎么处理？
（1）进样体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%。
（2）在进样阀中造成峰扩展：进样前后排除气泡以降低扩散。
（3）数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点。
（4）检测器时间常数过大：设定时间常数为第一峰半宽的10%。
（5）检测池体积过大：用小体积池，卸下热交换器。
（6）流动相粘度过高：增加柱温，采用低粘度流动相。
（7）保留时间过长：将连接管径和连接管长度降至最小，采用细内径管路。
（8）柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小，采用细内径管路。
（9）样品过载：降低进样浓度，或减少进样体积。
总之，色谱柱使用与色谱分析中常见的问题还是很多，遇到问题要掌握色谱常见故障排除原则，即（1）确定问题在哪；（2）一次只改变一种因素，方便对照；（3）确保同样的问题发生过两次；（4）认真记录好排除故障的工作。