本文介绍了胡萝卜素检测的一般方法,简单快速,当然对于数据精度要求比较高的人还是推荐高效液相色谱法。

胡萝卜素

原理:

      胡萝卜素不溶于水而溶于有机溶剂,经过粉碎的样品可用有机溶剂提取,置于活性MgO与硅藻土助滤剂层析柱上分离,用丙酮-己烷液洗脱后在436nm处测定吸光度,求出其含量。

仪器设备

(1).高速组织匀浆机。 (2).恒温水浴。
(3).分液漏斗。 (4).托盘天平(感量0.01g)。
(5).量筒:100mL 1支,50mL 1支,10mL 1支。 (6).100mL容量瓶2个。
(7).层析柱管。 (8).真空泵。
(9).100mL烧杯1个。 (10).收集管。
(11).真空蒸发器。 (12).721分光光度计
(13).真空过滤装置。 (14).玻璃棉。

试剂

(1).丙酮
(2).己烷(须加入NaOH重蒸馏)
(3).吸附剂:活性MgO
(4).助滤剂:硅藻土
(5).洗脱液:丙酮-己烷(1:9)
(6).MgCO3试剂
(7).无水Na2SO4试剂

方法步骤:

(1).样品提取:将叶片切碎后称取2〜5 g 置于高速组织匀浆器中,加入40 mL丙酮、60 mL 己烷、0.1 g MgCO3,匀浆5 min,然后真空过滤或静止澄清。将上清液转入分液漏斗中,样品残渣用2份25 mL丙酮,1份25 mL己烷进行洗涤,洗涤液并入提取液中。用5份100 mL的水洗涤提取液以洗去其中的丙酮,弃去水。将上层己烷液转入100 mL容量瓶中,加入9 mL丙酮,再用己烷稀释到刻度。在这里也可用无水乙醇代替丙酮,用80mL乙醇及60mL己烷提取样品。
(2).层析分离:将活性MgO与硅藻土助滤剂按1:1混合均匀,装入层析柱管中,管底先装一些玻璃棉,然后松散地装15cm高的混合吸附剂,将其置于真空装置上抽真空致紧,压平柱顶吸附剂表面。吸附剂装柱10cm高,在吸附剂表面上再装一层无水Na2SO4.
      将层析柱与真空泵相连,加入样品的提取液到顶部,用50 mL丙酮-己烷洗脱液进行洗脱,将有色的胡箩卜素从柱上洗脱。整个操作过程中应保持柱顶面上有一层溶液。
      收集胡萝卜素的洗脱液(胡萝卜素首先被洗脱下来,叶黄素、胡萝卜素的氧化产物及叶绿素等被吸附停留在柱中)。收集的洗脱液用真空蒸发器除去溶剂,用丙酮-己烷液溶解残渣,移入 100 mL容量瓶中,并稀释至刻度,供分光光度计测定。
(3).测定:用1 cm比色杯,以丙酮-己烷液为空白对照液调节分光光度计零点,在436nm波长处测定上述待测液的吸光率。
(4)结果计算:

胡萝卜素检测计算公式

式中,A436:测得的吸光度;5.1:胡萝卜素的消光系数(μg/mL);FW:1mL测定样品液中的样品含量(g/mL)。

400-066-8286