本文介绍了气相色谱法测定植物中乙烯含量的测定方法，包括植物中乙烯含量测定的原理，实验所需试剂，实验步骤以及实验注意事项。乙烯( ethylene)是植物内源激素之一,以气体形式存在。准确测定乙Z烯释放量,对认识乙烯在植物抗逆生理、发育生理、开花生理中的作用有着重要的意义。

原理：

      气相色谱具有灵敏度高、稳定性好等优点。色谱仪中的分离系统包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附或溶解能力不同,因此各种物质的分配系数(或吸附能力)不一样。当含混合物的待测样(含乙烯的混合气)进人固定相以后,不断通以流动相(通常为N2或H)待测物不断地冉分配，最后,依照分配系数大小顺序依次被分离,并进入检测系统得到检测。检测信号的大小反映出物质含量的多少,在记录仪上就呈现色谱图。要使待测物得到充分的分离,就需要一种合适的固定相。乙烯往往与乙炔、乙烷难以分离,而采用GDx502作为固定相则可有比较满意的效果。

材料、仪器设备及试剂

(一)材料

      水稻幼苗(或苹果、香蕉等)若干。

(二)仪器设备

      密封装置为带空心橡皮塞的三角瓶,或真空f燥器,气相色谱仪(163型Hi-1achi)。

(三)试剂

      标准乙烯。

实验步骤

1.材料处理

      将试验材料进行不同的处理(如离体、伤害、发芽、黑暗、辐射、冷藏、催熟等),然后置于密封装置中若干时间。

2.将色谱仪启动启动步骤如下:

      (1)检测仪器各部件是否复位。若没有,需复位。

      (2)打开流动相(N₂),将压力调至5kg/cm²。然后打开仪器上的N₂阀,将流速调至25 mL/min(管道1,2一样)。

      (3)插上电源,打开仪器上电源开关。

      (4)调节柱温至60℃,将进样口温度调至100C(乙烯为气体,进样口温度不需太高)。

      (5)打开点火装置电源及空气压缩机开关,调节适当的量程和衰减( range andattenuation) ,关机时,量程应打至1,哀减为∞。

      (6)打开钢瓶氢气阀,调压力为1.0 kg/cm²(两管道一样),同时将空气压力调至0.5kg/cm²。打开记录仪电源,并选择10mV的输出电压和适当的走纸速度(10 mm/nin)。

      (7)点火:空气和氢气调好后,将选择键打到ON位置。按点火键10s左右，氢气即可在燃烧室燃烧,在点火并点着时,可以看到记录笔向上移动。

      (8)条件选择:将选择键打到2,并将空气压力调至1.0 kg/cm² ,氢气调至0.5-0.7kg/cm²之间两管道-一样)。待基线稳定后即可正式测定。

3.测定

      (1)取一.定浓度(pL/L,以N₂作为稀释剂)、一定量(100-1000μL)的标准乙烯进样,并注意出峰时间。待乙烯峰至顶端时即为乙烯的保留时间,重复3-4次,得到平均值。该平均值即作为样品中乙烯定性的依据之一。

      (2)取同样量的待测样品,注入色谱柱(进样)。待样品峰全部出完后，郎可做下一个样品。

      (3)定性:A.外标法定性:样品中与标准乙烯保留时间相同的峰,即为样品乙烯峰。B.内标法定性:在得到某一.样品的色谱图后,向该样品中加入一定量的标准乙烯进样,若某峰增高,该峰即为样品中乙烯峰。

4.关机步骤

      待得到所有样品色谱图后,可关机,关机步骤如下。

      (1)关掉氢气总阀或氮气总阀。

      (2)关掉空气压缩机。

      (3)将量程或衰减复位,选择键打到OFF。

      (4)关掉记录仪。

      (5)待H₂、N₂全部排完后,将所有阀复位。

      (6)关掉主机电源,并拔下插头。

结果计算