乙烯是植物生长发育过程中具有重要调节作用的内源性激素之一,但是在植物生长发育的过程中难以检测气态乙烯的含量。自研究发现乙烯生成的前体(1-氨基环丙烷羧酸,ACC),确定了植物体内乙烯生物合成途径后,我们通常通过检测乙烯前体ACC的含量来指示植物体内乙烯的含量。

    本文主要介绍了用液质联用的方法检测植物组织乙烯合成前体ACC含量。为提取ACC,本实验采用水相溶液提取方法,而后过MCX小柱净化浓缩样品。该方法流程相对简单,待测物损失较小,同时由于Qtrap6500仪器的灵敏性,不需过多繁琐的净化步骤即可准确检测大部分痕量待测物。

可滴定的元素
    锂、铍、硼、氟、钠、镁、铝、硅、磷、、钾、钙、钪、钛、钒、铬、铁、钴、镍、铜、锌、钾、锗、砷、锡、硒、铷、锶、钇、锆、铌、钼、铑、铬、铟、锡、锑、碲、碘、铯、钡、铪、钨、铱、铂、金、汞、铊、铅、铋、铈、钕、钐、

一、实验目的

    通过检测植物组织中ACC含量,间接反应植物体内乙烯的合成速率。

二、实验材料

    水稻叶片

三、实验试剂与仪器

    试剂:
    1-氨基环丙烷羧酸(ACC)标准样品(购自百灵威公司)
    色谱级甲醇(购自Tedia公司)
    其它试剂均为国产分析纯。

    仪器:
    台式高速离心机(德国SORVAL公司)
    AR5120电子天平(美国AHOΜS公司)
    Aglient1290高效液相色谱仪(美国agilent公司)
    SCIEX-6500Qtrap(MSMS)(美国AB公司)
    便携式超声波清洗仪(深圳杰拓科技)
    氮吹仪(杭州米欧仪器有限公司)

四、实验步骤

1、物质提取:

    (1) 准确称量约0.2 g水稻叶片样品,于液氮中研磨至粉碎,转移至50 ml离心管中;
    (2) 向粉末中加入2 ml去离子水,在超声清洗仪中水浴超声30 min;
    (3) 4℃,10000 r/min离心5 min,取上清,调PH至4.0;
    (4) 加入8 ml氯仿,振荡混匀,4℃,10000 r/min离心5 min,取上清;
    (5) 上清液过经3 ml甲醇,3 ml 去离子水活化过的MCX小柱,并以2 ml甲醇,1 ml去离子水淋洗柱子;
    (6) 以5 ml 1M氨水洗脱柱子;
    (7) 过0.22 µm滤膜,进HPLC-MS/MS检测。

2、液质检测

    (1) 标准溶液配制
以水为溶剂配制梯度为1 ng/ml,2 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,20 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml 的ACC标准溶液。     (2)液相条件
色谱柱:安捷伦poroshell 120 SB-C18反相色谱柱(2.1×150,2.7 um); 柱温:30℃; 流动相:A:B=乙腈:水=30%:70%;等梯度洗脱,165 µl/min; 进样体积:2 µl。     (3) 质谱条件
气帘气:15 psi 喷雾电压: 4500 v 雾化气压力:65 psi 辅助气压力:70 psi 雾化温度: 400 ℃

五、结果计算

    样品中ACC含量(ng/g)=检测浓度(ng/ml)×体积系数(ml)/质量系数(g),
其中体积系数为样品最终溶解时所用的溶液体积,质量系数为称取的样品质量。
    本文只是对ACC检测实验做简单的介绍,因不同植物样本类型、不同组织部位含量的差异,具体步骤还要视具体情况而定,本文仅供参考。

400-066-8286