乙烯是植物生长发育过程中具有重要调节作用的内源性激素之一，但是在植物生长发育的过程中难以检测气态乙烯的含量。自研究发现乙烯生成的前体（1-氨基环丙烷羧酸,ACC），确定了植物体内乙烯生物合成途径后，我们通常通过检测乙烯前体ACC的含量来指示植物体内乙烯的含量。

    本文主要介绍了用液质联用的方法检测植物组织乙烯合成前体ACC含量。为提取ACC，本实验采用水相溶液提取方法，而后过MCX小柱净化浓缩样品。该方法流程相对简单，待测物损失较小，同时由于Qtrap6500仪器的灵敏性，不需过多繁琐的净化步骤即可准确检测大部分痕量待测物。

一、实验目的

    通过检测植物组织中ACC含量，间接反应植物体内乙烯的合成速率。

二、实验材料

    水稻叶片

三、实验试剂与仪器

    试剂：
    1-氨基环丙烷羧酸(ACC)标准样品（购自百灵威公司）
    色谱级甲醇（购自Tedia公司）
    其它试剂均为国产分析纯。

    仪器：
    台式高速离心机（德国SORVAL公司）
    AR5120电子天平（美国AHOΜS公司）
    Aglient1290高效液相色谱仪（美国agilent公司）
    SCIEX-6500Qtrap(MSMS)（美国AB公司）
    便携式超声波清洗仪（深圳杰拓科技）
    氮吹仪（杭州米欧仪器有限公司）

四、实验步骤

1、物质提取:

    (1) 准确称量约0.2 g水稻叶片样品，于液氮中研磨至粉碎，转移至50 ml离心管中；
    (2) 向粉末中加入2 ml去离子水，在超声清洗仪中水浴超声30 min；
    (3) 4℃，10000 r/min离心5 min，取上清，调PH至4.0；
    (4) 加入8 ml氯仿，振荡混匀，4℃，10000 r/min离心5 min，取上清；
    (5) 上清液过经3 ml甲醇，3 ml 去离子水活化过的MCX小柱，并以2 ml甲醇，1 ml去离子水淋洗柱子；
    (6) 以5 ml 1M氨水洗脱柱子；
    (7) 过0.22 µm滤膜，进HPLC-MS/MS检测。

2、液质检测

    (1) 标准溶液配制
以水为溶剂配制梯度为1 ng/ml，2 ng/ml，5 ng/ml，10 ng/ml，20 ng/ml，50 ng/ml，100 ng/ml 的ACC标准溶液。     (2)液相条件
色谱柱：安捷伦poroshell 120 SB-C18反相色谱柱（2.1×150,2.7 um）； 柱温：30℃； 流动相：A:B=乙腈：水=30%：70%；等梯度洗脱，165 µl/min； 进样体积：2 µl。     (3) 质谱条件
气帘气：15 psi 喷雾电压： 4500 v 雾化气压力：65 psi 辅助气压力：70 psi 雾化温度： 400 ℃

五、结果计算

    样品中ACC含量(ng/g)=检测浓度(ng/ml)×体积系数(ml)/质量系数(g)，
其中体积系数为样品最终溶解时所用的溶液体积，质量系数为称取的样品质量。
    本文只是对ACC检测实验做简单的介绍，因不同植物样本类型、不同组织部位含量的差异，具体步骤还要视具体情况而定，本文仅供参考。