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一、概述
亮氨酸氨基肽酶（Leucine aminopeptidase，LAP，酶编号：3.4.11.1）是一种催化多肽链释放氮末端亮氨酸或其他氨基酸的水解酶，在土壤中是一种与氮循环相关的酶，土壤中的亮氨酸氨基肽酶潜在活性高低与微生物获取氮的速率和生物地球化学过程速率有关（Burns et al., 2013；Sinsabaugh et al., 2009）。比色法对 LAP 的测定是根据被 LAP 催化分解的 L-亮氨酸β-萘胺产生的 β-萘胺的量来计算。
二、检测指标
| 指标 | 检测方法 | 样品要求 | 询价 |
|---|---|---|---|
| 土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP） | 陌凡生物-亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）检测试剂盒 | 土壤鲜样/风干样 |
三、检测原理
土壤亮氨酸氨基肽酶能够催化L-亮氨酸对硝基苯胺（L-Leucine-p-Nitroanilide）水解生成对硝基苯胺（p-Nitroaniline）。对硝基苯胺在405nm处具有特征吸收峰，其吸光度的变化与酶活性成正比。通过测定反应体系在405nm处吸光度的变化速率，可以计算出土壤亮氨酸氨基肽酶的活性。
四、检测步骤
1、土壤样品准备
取样：取新鲜土壤样品，自然风干或在37℃烘箱中风干。
过筛：将风干后的土壤样品过30-50目筛，以保证样品的均匀性和去除大颗粒杂质。
2、试剂准备
试剂一：通常为液体试剂，需按照说明书要求保存在4℃条件下。
试剂二：通常为粉剂，使用前需加入适量的丙酮或其他指定溶剂充分溶解，配制后在4℃避光保存。
3、样品测定
分光光度计预热：将分光光度计预热30分钟以上，调节波长至405nm，用蒸馏水调零。
在离心管中依次加入以下试剂：土壤样品（如100mg）、甲苯（如50μL）、试剂一（如850μL）、试剂二（如100μL）。
反应条件：充分混匀后，在30℃条件下反应1小时。
终止反应：反应结束后，立即进行沸水浴处理5分钟，以终止酶反应。
离心取上清液：将反应后的样品以13000g离心10分钟，取上清液。
4、吸光度测定
测定吸光度：将上清液置于1mL玻璃比色皿中，在405nm处测定吸光度，记为A测定。
对照管设置：同时设置一个对照管，不加试剂二，其他步骤相同，测定其吸光度，记为A对照。
计算ΔA：ΔA测定=A测定-A对照。
5、标准曲线绘制
标准品梯度稀释：取一系列已知浓度的标准品溶液，按照上述步骤测定其吸光度。
绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
6、酶活性计算