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卡文思检测拥有多年的酵母双杂交技术服务经验,能够从提供从酵母文库构建、酵母文库筛选、点对点验证的一站式服务,欢迎咨询。


服务优势


酵母双杂交服务优势



酵母双杂交检测服务项目列表


服务项目 说明 周期(工作日)
酵母文库构建①RNA提取
②cDNA合成与接头连接
③cDNA按长度分离
④重组到酵母双杂交载体pGADT7上
⑤文库检测
20
酵母文库筛选①自激及毒性活检
②文库质粒转化
③酵母杂交及文库筛选
④筛选结果测序
⑤筛选结果回转验证
60
点对点验证①构建
②转化
③验证
30

建库交付标准


产品名称 交付标准 包装形式 储存条件
酵母文库甘油菌①(文库铺板检测库容量和插入片段长度,通过PCR鉴定转化子的插入片段)
②库容:大于1*107CFU
③平均插入片段:大于800bp
④阳性率:大于90%
1.5ml螺旋管-80℃
文库构建报告电子版Word和PDF格式常温

筛库交付标准


产品名称 交付标准 包装形式 储存条件
酵母双杂交文库筛选结果菌株①≤30个阳性克隆质粒
②含互作的质粒、质粒的大肠菌株、转化好
③质粒的酵母菌株
1.5ml螺旋管-80℃
文库筛选报告电子版Word和PDF格式常温
文库筛选图片电子版JPG格式常温

点对点验证交付标准


产品名称 交付标准 包装形式 储存条件
重组质粒DNA各一份/1.5ml螺旋管-80℃
实验组酵母菌株各一份/1.5ml螺旋管-80℃
实验报告电子版Word和PDF格式常温

酵母双杂交检测原理


以Gal4 系统为例,BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时,DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合,转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下,单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列(GAL UAS)结合但不能引起转录,单独的AD 则不能与GAL UAS 结合;只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时,BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录,从而激活下游报告基因,通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。

酵母双杂交原理

实验流程


酵母双杂交实验流程





五、材料要求

1、酵母文库构建
构建指定的酵母双杂交cDNA文库,需提供新鲜的组织、细胞或总RNA,标准如下: (需要确保样品新鲜或者新鲜的样品保存良好)
细胞样本:细胞数量大于1*107
植物样本:大于2g
动物样本:大于1g 总RNA:大于200μg

2、酵母文库筛选
仅文库筛选,需提供酵母文库,标准如下:
①质粒>50μg
②阳性率>90%/菌有效库容>107
③诱饵蛋白的基因序列

3、点对点验证
Bait及Prey蛋白的基因序列或Bait及Prey的酵母双杂表达载体