一、概述

叶绿素（chlorophyll）是高等植物进行光合作用的重要物质，同时也是绿色植物的主要色素，主要有叶绿素ａ和叶绿素ｂ两种，在一些藻类中还有叶绿素ｃ和叶绿素ｄ。叶绿素是脂溶性色素，不溶于水，可溶于丙酮、乙醇和石油醚等有机溶剂，在颜色上，叶绿素ａ呈蓝绿色，叶绿素ｂ呈黄绿色，它们的含量之比约为 3∶1。在分子结构上，叶绿素由脱镁叶绿素母环、叶绿酸、叶绿醇、甲醇、二价镁离子等部分构成叶绿素ａ和叶绿素ｂ在结构上的差别仅在于第Ⅱ吡咯环上的一个－ＣＨ3被 －ＣＨＯ所取代，叶绿素分子的卟啉环是由四个吡咯环通过四个甲烯基连接成的大环，环中心的镁离子偏于正电荷，相邻的氮原子偏于负电荷，因而具有极性与亲水性，而另一端的叶醇基是由四个异戊二烯基单位所组成的长链状的碳氢化合物，具有亲脂性。

二、检测指标

可测指标	检测方法	样品	询价
叶绿素总量、叶绿素a、叶绿素b	乙醇/丙酮提取-比色法测定	鲜样
叶绿素a	参考HJ 897-2017 水质 叶绿素a的测定 分光光度法测定	鲜样
叶绿素a、叶绿素b	①高效液相色谱法 ②乙醇-丙酮混合液浸提法测定	鲜样

三、测定方法

叶绿素含量的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过目前应用最为广泛的还是分光光度法。叶绿素提取液的吸收光谱表明：有两个强吸收峰，分别在红光区和蓝紫区，不同提取溶剂和原料所得的叶绿素溶液的吸收光谱比较相似。叶绿素ａ、叶绿素ｂ的红区最大吸收峰分别在663nm、645nm附近，在蓝紫区分别为 429nm、453nm附近。由于提取溶剂和原料不同，对叶绿素提取液进行光谱扫描后，所得的最大吸收值可能有较小范围的浮动。

分光光度法测定叶绿素含量主要依据Arnon公式，其计算方法是：分别以提取溶剂作空白，测定叶绿素提取液吸光度 Ａ₆₄₅、Ａ₆₆₃，根据下面的公式：

叶绿素a浓度（mg/L）：C_a＝12∙7Ａ₆₆₃－2∙69Ａ₆₄₅；

叶绿素b浓度（mg/L）：C_b＝22∙9Ａ₆₄₅－4∙68Ａ₆₆₃；

叶绿素总浓度（mg/L）：C_a+b＝C_a＋C_b。

上述公式可以定量地说明叶绿素提取液受不同影响因子作用后的降解率。

高效液相色谱 （HPLC） 定量检测叶绿素含量准确率较高，效果很好。戴荣继等人采用HPLC测定饮用水中藻类叶绿素含量，实验表明:用甲醇和丙酮作为流动相，体积比为 80:20时，同时在流动相中加入质量分数为 0.1％的冰醋酸，流速为 1.0mL/min。利用每一种色素的色谱峰面积进行定量，叶绿素a、叶绿素b的定量可通过外标法由工作曲线求得。该方法对叶绿素a、叶绿素b检测限分别可达0.010、0.005μg/L。

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