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植物理化检测


    总糖是指具有还原性的葡萄糖、乳糖、果糖等糖类。

总糖

一、测定方法

    采用盐酸水解比色法测定总糖含量。

二、测定原理

    植物中水溶性糖和水不溶性多糖经盐酸溶液水解后转化为还原糖,水解物在硫酸的作用下,迅速脱水生成糖醛衍生物,并与苯酚反应生成橙黄色溶液,反应产物在490nm处比色,采用外标法定量。

三、仪器及试剂

    ①浓盐酸;浓硫酸;
    ②50g/L苯酚溶液:称取5g苯酚,用水溶解于100ml容量瓶中,定容后摇匀,置于4℃避光贮存;
    ③100mg/L葡萄糖标准溶液:将葡萄糖于105℃恒温烘干至恒重,称取葡萄糖约0.1g,用水溶解于1000ml容量瓶中,定容至刻度后摇匀,置于4℃冰箱中避光贮存。

四、实验步骤

    ①试样溶液的制备:
  称取约0.25g试样,精确到0.0001g,倒入250ml锥形瓶中,加入50ml水喝15ml浓盐酸,装上冷凝回流装置,置于100℃水浴中水解3h,冷却至室温后过滤,在用蒸馏水洗涤滤渣,合并滤液及洗液,用水定容至250ml,此溶液为试样测试液。
    ②标准曲线的制定:
  分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的葡萄糖标准溶液至10ml具塞试管,用蒸馏水补至1ml,向试液中加入1ml苯酚溶液,然后迅速加入5ml浓硫酸,反应液静止放置10min,使用涡旋振荡器使反应液混合,然后将试管放置于30℃水浴锅中反应20min,取适量反应液在490nm处测吸光度,以葡萄糖质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

    ③总糖含量的测定:
    准确吸取试样测试液0.2ml于10ml具塞试管中,用蒸馏水补至1ml,以空白溶液调零,测得吸光度,以标准曲线计算总糖含量。

五、计算

    总糖含量mg/g=C×(Vt/V0)×D/m

    C——根据标准曲线查得样品的含量,mg;
    Vt——提取液总体积,ml;
    V0——滴定所用的样品液体积,ml;
    m——称样量,g;
    D——分取倍数,定容体积/分取体积。