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    还原型谷胱甘肽（N-(N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基)甘氨酸。还原性谷胱甘肽溶于液氨、稀醇、水和甲基甲酰胺，不溶于丙酮、醚和醇。还原性谷胱甘肽可降低肺组织中炎性细胞因子（IL-6，IL-18），中性粒细胞的浓度，提高血清Ca2 +水平，可用于治疗ANP。还原性谷胱甘肽是通过在应激和非应激皮层神经元中的不同途径来调节产生的。

一、测定方法

    采用分光光度法测定还原型谷胱甘肽含量。

二、实验原理

    谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验试剂

    ①50g/L三氯乙酸（TCA）溶液（含5mmol/L EDTA-Na2）；
    ②0.1mol/L磷酸钠缓冲液（PH7.7）；
    ③0.1mol/L磷酸钠缓冲液（PH6.8）；
    ④4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（DTNB）溶液；
    ⑤100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液。

四、实验步骤

    ①提取：称取2.5g样品置于研钵中，加入5ml经4℃预冷的50g/L TCA，在冰浴条件下研磨成匀浆，于4℃、12000r/min离心20min，收集上清液来测定谷胱甘肽含量。
    ②标准曲线制作：取6支试管，分别加入100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，每支试管中加入1ml蒸馏水，1ml 0.1mol/L磷酸钠缓冲液（PH7.7），0.5ml 4mmol/L DTNB溶液。以0号为参比调零，测定显色液在412nm处的吸光度。
    ③测定：取两支试管，分别加入1ml上清液，1ml 0.1mol/L磷酸钠缓冲液（PH7.7），向一支中加入0.5ml 4mmol/L DTNB溶液，另一支试管中加入0.5ml磷酸钠缓冲液（PH6.8），将两支试管置于25℃保温10min，同标准曲线分别测定吸光度。

五、计算

    还原型谷胱甘肽含量μmol/g=（n×V）/（Vs×m）

    n——优标准曲线查得的溶液中还原型谷胱甘肽的物质的量，μmol；
    V——提取液总体积，ml；
    Vs——测定时取液体积，ml；
    m——样品称重量，ml。