可溶性淀粉合成酶(souluble starch synthase,SSS)主要参与直链淀粉中分支链的合成。可溶性淀粉合成酶具有多种同工酶形式,不同可溶性淀粉合成酶亚型活性相互调节影响淀粉粒的结构。
采用分光光度法测定可溶性淀粉合成酶活力。
SSS催化ADPG与淀粉引物反应生成 ADP,添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶后,可催化 NADP+还原为NADPH,NADPH 生成量与ADP 生成量呈正比,根据 NADPH 增加量,可计算出 SSS 活性。
分光光度计、离心机等;
①粗酶液制备
取植物样品0.1g,研磨,冰浴匀浆,离心 10min,取上清液,冷藏备用。
②测定
分光光度计预热 30min,波长调至 340nm,蒸馏水调零。加入各试剂及酶液。混匀后在该波长下记录吸光值。
可溶性淀粉合成酶活性=[ΔA×V÷(ε×d)×10*9]÷(V ‘÷V 0×W)÷T×n
ΔA——340 nm处起始吸光值与2min后的吸光值之差;
V——反应体系总体积, l;
ε——NADPH 摩尔消光系数;
d——比色皿光径;
V ‘——加入样本体积, ml;
V 0——加入提取液体积, ml;
W——样本质量;
T——反应时间, min;
n——稀释倍数。