植物常规理化检测


    淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是参与植物支链淀粉合成的关键酶,它能切开α-1,4-葡聚糖直链供体的α-1,4-糖苷键并同时催化所切下的短链与受体链间α-1,6-糖苷键的形成,从而产生分支。淀粉分支酶和淀粉去支酶是决定淀粉链长的分布的两种酶类。

一、测定方法

采用分光光度法测定淀粉分支酶活力。

二、测定原理

淀粉分支酶和可溶性淀粉反应生成支链淀粉,支链淀粉遇碘呈现蓝色,可根据显色后的溶液在660nm处的吸光值测定淀粉分支酶的活性。

三、仪器试剂

分光光度计、离心机等;
可溶性淀粉、柠檬酸缓冲液、HEPES-NaOH (pH 7.5)、EDTA、KCl、聚乙烯吡咯烷酮、三氯乙酸(TCA)、碘等。

四、实验步骤

①粗酶液制备

取0.5g植物样本,加入提取液研磨成浆,离心后取上清液,留用。

②测定

将上诉粗酶液稀释,加0.5%可溶性淀粉,37℃恒温水浴中保温10 min后置沸水浴中终止反应。再加碘液显色反应10 min后测定波长660 nm处吸光度值,设置对照组。每降低一个百分率的碘蓝值即为木薯淀粉分支酶SBE的一个活性单位(U)。

五、结果分析

淀粉分支酶活性=(OD-OD’)×100%

OD——对照组吸光值;
OD’——处理样的吸光值。