蛋白酶（protease）又名蛋白水解酶（proteinase），是催化多肽或水解蛋白质的一类酶的总称。蛋白酶广泛存在于动植物中，对机体的新城代谢及生物调控起关键作用。蛋白酶可分为内肽酶及端肽酶，分别从蛋白质中间及末端降解蛋白质。

一、测定方法

采用福林-酚试剂法测定蛋白酶活力。

二、测定原理

福林-酚试剂在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸，因此，可利用蛋白酶分解酪素生成含酚基氨基酸的显色反应，来测定蛋白酶的活力。

三、实验试剂

0.4mol/L碳酸钠溶液；0.4mol/L的三氯醋酸液；0.5mol/L的NaOH；10.00mg/ml酪素溶液；100μg/ml酪氨酸标准溶液；等。

四、实验步骤

①酶样的制备

称取1g固体酶，用少量的缓冲液溶解，捣研,然后分别将上清液倒入容量瓶,沉渣需用缓冲液再次捣研,稀释到100ml,过滤充分。将滤液留作测试酶。

②标准曲线的绘制

L-酪氨酸标准溶液按下表配制

分别测定溶液吸光度，纵坐标为吸光度，横坐标为酪氨酸的浓度，绘制标准曲线。

③样品测定

将酪素放入40±0.2℃恒温水浴中，预热。取4支试管，各加入1ml酶液。取一支作为空白管，加2ml三氯乙酸，其他3管作为测试管各加入1ml酪素，摇匀，40℃保温10min。取出试管，3支测试管中各加入2ml三氯乙酸，空白管中加1ml酪素。静置10min，过滤。各取1ml滤液，分别加5ml的Na2CO3以及1ml福林试剂。40℃显色20min后，在680nm处测吸光度。

五、结果分析

蛋白酶的活力X= A×K×8/2×1/10×n×E

X——样品的酶活力，u/g(u/mL)；
A——试样溶液的平均吸光度；
K——吸光常数；
8——反应试剂的总体积，mL；
10——酶解反应时间，min；
n——酶液稀释总倍数；
E——紫外法与福林法的换算系数。