植物常规理化检测


    抗坏血酸氧化酶(Ascorbic Acid Oxidase,ASO)是一种含铜的酶,能催化抗坏血酸的氧化。植物体内大部分糖类物质脱氢后,会把H质子转移给辅酶,然后在经过谷胱甘肽把H质子传给抗坏血酸,在抗坏血酸氧化酶的作用下,抗坏血酸被氧化为氧气,与H质子生成水。

    多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PPO)是一种金属蛋白酶,广泛存在于植物体内,多酚氧化酶可催化分子氧化酚或多酚类物质氧化成对应的醌。

一、测定方法

采用滴定法测定抗坏血酸氧化酶活性。

二、实验原理

抗坏血酸氧化酶能氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸,多酚氧化酶可通过分子氧化酚或多酚形成相应的醌,形成的醌能被抗坏血酸还原。利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量测定抗坏血酸氧化酶的活性,利用碘液滴定剩余抗坏血酸。

三、实验试剂

①pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10%三氯乙酸、1%淀粉;
②0.05mol/L碘液:碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水,加冰醋酸1ml,再加0.1mol/L碘酸钾12.5ml,定容至250ml。

四、实验步骤

①酶活性测定

取4个三角瓶(50-100ml),标上号码,按下表分别加入试剂(ml)

编号 蒸馏水 0.1%抗坏血酸 0.02mol/L焦儿茶酚 酶溶液 煮5分钟酶
1 4 2 2
2 4 2 2
3 3 2 1 2
4 3 2 1 2

将4个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10%三氯乙酸1ml,摇匀,终止酶反应。

②滴定

冷却后,分别加入3滴1%淀粉(马铃薯可不加,因其本身含的淀粉已足够),用碘液滴定至蓝色。

五、结果分析

K/(g•min-1)=0.44×V/(a×w×t)

抗坏血酸氧化酶活性U1=[V2-V1]×K

多酚氧化酶活性U2=[(V4-V3)×K]-U1

V——酶提取液总体积ml;
a——测定时酶液用量ml;
t——测定时间min;
W——样品鲜重g;
V1——1号瓶滴定毫升数ml;
V2——2号瓶滴定毫升数ml;
V3——3号瓶滴定毫升数ml;
V4——4号瓶滴定毫升数ml。

400-066-8286