植物常规理化检测


    腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophorylase,ADPase)是植物合成淀粉和微生物合成糖原的一个限速酶,催化由1-磷酸葡萄糖与ATP反应形成腺苷二磷酸葡萄糖(ADPG)并释放能量的反应。了解AGPase对研究淀粉含量有重要的价值。

分光光度计

一、测定方法

采用分光光度法测定腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活力。

二、实验原理

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)催化1-磷酸葡萄糖生成ADPG。AGPase催化逆向反应生成1-磷酸葡萄糖,添加磷酸已糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶,可生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH。在340nm下测定NADPH增加速率,可计算出AGPase活性。

三、器材及试剂

分光光度计,离心机等。

四、实验步骤

①粗酶液制备

称取0.1g植物组织,加入1ml提取液,摇匀,离心,取上清液,冷藏备用。

②测定

分光光度计预热30min,波长调到340nm,蒸馏水调零。在测定管中加入试剂,摇匀,记录其在340nm下的吸光值。

五、结果分析

AGPase活性(U/g 鲜重)=[ΔA×V÷(ε×d)×10*9]÷(W×V’÷V0)÷T

ΔA¬——340nm波长下记录初始吸光度和2min后的吸光度之差;
V——反应体系总体积,L;
ε——NADPH摩尔消光系数,mol/L/cm;
d——比色皿光径,1cm;
W——样品质量,g;
V’——加入样本体积,mL;
V0——加入提取液体积,mL;
T——反应时间,min。